En el 2017, las enfermedades cardiovasculares fueron la principal causa de muerte en México, caracterizándose por la formación de trombos que pueden ocluir los vasos sanguíneos. En la terapia antitrombótica, la aspirina y la heparina, previenen la formación de trombos, mientras la estreptoquinasa disuelve los formados. Sin embargo, dichos fármacos han reportado diversos efectos secundarios. Así, las fuentes vegetales son opción al tratamiento farmacológico debido a sus menores efectos secundarios. La chaya (Cnidoscolus aconitifolius), empleada para mejorar la circulación sanguínea, posee metabolitos antitrombóticos pertenecientes a los flavonoides, saponinas y triterpenos. Sin embargo, se requiere evidencia que compruebe su actividad frente a este padecimiento. En este estudio se evaluó la actividad antitrombótica in vitro y se identificaron los metabolitos mayoritarios de extractos de chaya. Las hojas se secaron, molieron y maceraron, obteniendo los extractos acuoso (Ac), etanólico (EtOH), acetónico (An), acetato etílico (AcOEt), éter dietílico (Et2O) y hexánico (Hx). Los extractos fueron evaluados a 0.1, 1.0 y 10.0 mg/mL mediante los ensayos inhibición de la agregación plaquetaria (IAP), inhibición de la fosfolipasa A2 (IFA2), tiempo de protrombina (TP), tiempo de tromboplastina parcialmente activada (TTPA) y lisis del coágulo (LC). Se empleó cromatografía de gases acoplada a espectrometría de masas (GC-MS) para identificar los metabolitos mayoritarios en los extractos con mayor actividad antitrombótica. En la prueba IAP, los extractos Ac y EtOH a 10 mg/mL presentaron 100% de inhibición. En la prueba IFA2, los extractos con mayor efecto fueron el EtOH, Et2O y Ac a 10 mg/mL. En los ensayos TP y TTPA los extractos Ac y An a 10 mg/mL, presentaron el mayor efecto anticoagulante y en la LC, los extractos con mayor actividad fueron el AcOEt, An y Hx a 10 mg/mL. Los extractos Ac y ETOH presentaron mayor potencial antitrombótico y por su naturaleza química, únicamente el EtOH fue analizado por GC-MS. Dicho extracto reportó poseer vitamina E, diversos ácidos grasos y triterpenos. En conclusión, el extracto etanólico de chaya presentó mayor actividad antiagregante que el control positivo y todos los extractos demostraron moderada actividad inhibitoria de la fosfolipasa A2, anticoagulante y fibrinolítica en comparación con los controles positivos.