Desarrollo y validación de un método analítico por cromatografía de líquidos de alta eficiencia para la cuantificación de citroflavonoides en plasma de roedor

Abstract

"En el presente trabajo se llevó a cabo el desarrollo y validación de un método por CLAE para la cuantificación simultánea de cinco flavonoides (naringina, naringenina, hesperidina, rutina y quercetina) en plasma de roedor, esto con la finalidad de establecer los parámetros farmacocinéticos de dichos metabolitos y comprender los procesos metabólicos que proceden a su absorción. Para el desarrollo del método cromatográfico se utilizó un equipo CLAE marca Agilent Technologies 1200 Series (San José, CA, EUA) equipado con detector de arreglo de diodos e inyector automático. Se utilizó como fase estacionaria una columna Phase Sep Spherisorb de C18, con dimensiones de 250 mm de longitud x 4.6 mm de diámetro interno y un tamaño de partícula de 5 µm; la fase móvil consistió en H3PO4 al 1% (A), metanol (B) y Acetonitrilo (C); con un flujo de 1.3 mL/min; además, se empleó un sistema de disolventes en condiciones de gradiente. El volumen de inyección fue de 10 μL, y la temperatura del termostato fue de 30 °C, con un tiempo de post corrida de 5 minutos. Para llevar a cabo la detección de los flavonoides se seleccionaron 3 longitudes de onda, 256, 284 y 370 nm. Para la optimización del método de extracción en fase sólida, se utilizó un diseño de Box-Behnken con el que se determinó que el pH del buffer empleado juega un papel importante en el proceso de extracción, siendo el pH de 3.19 el óptimo para llevar a cabo este proceso. La validación del método analítico se llevó a cabo de acuerdo a los lineamientos de la AOAC, resultando un coeficiente de correlación lineal mayor a 0.99 en un rango de trabajo entre 0.5 a 7.5 μg/mL. Los LD y LC del método fueron hallados entre 0.02 a 0.10 µg/mL y entre 0.04 a 0.19 µg/mL respectivamente. El porcentaje de recuperación total del método fue de 95.78 ± 1.55 %, mientras que la precisión intradía de éste fue de 2.28 ± 1.34 %, lo que demostró que e"